穩定同位素內標應選擇同位素豐度>98%以上的標準品
更新時間:2022-08-25 點擊次數:488次
穩定同位素內標記化合物與對應的未標記化合結構相似,所以理化性質也極為相似,如果將穩定同位素標記物與對應的未標物用同樣的色譜方法檢測,其保留時間也幾乎一致,無法分辨。且穩定同位素不具有放射性,無論在標記化合物合成、分離提純及應用過程中均無特殊防護要求,可作為內標用于臨床醫學研究及生物醫學、環境科學、食品檢測等諸多領域。
如何挑選穩定同位素內標?
1、應盡量選擇同位素豐度>98%以上的標準品。
2、如果選擇氘代產品作為內標,需選擇質量差大于3(D3)以上的產品。
3、13C,15N通常標記在分子的骨架結構上,其標記位點較為穩定,氘代產品容易與液相流動相溶劑中的活潑氫發生交換,因此穩定性不如13C,15N。如圖3,草甘膦如果用D標記的話,羧基、亞氨基、羥基上面的D都屬于活潑位點,很容易脫離母體化合物,所以安譜實驗選擇13C,15N來進行標記。另外考慮到氘標記物的合成較為簡便,價格便宜,因此在氘標記物能夠滿足實驗需求的情況下,也常選用氘標記物作為內標物。
4、標記位點還應遠離容易發生化學鍵斷裂的位置,以避開同位素效應的影響。在質譜中鄰苯二甲酸二甲酯的酯基容易斷裂,所以安譜實驗選擇氘標記在苯環上。如果母體化合物因化學鍵斷裂同時生成2個重要子單元結構化合物,可選擇雙標記母體化合物。
穩定同位素內標是質譜方法,沒有別的臨床檢測方法用到同位素內標。比如光吸收和免疫的方法,都無法分辨出被檢測物和同位素內標的區別,因為它們的理化性質太接近了。如果真的加進內標,那測出來的值肯定大大的偏高。只有質譜才能把同位素內標和要檢測的物質分得開,雖然它們的差別只有幾個道爾頓。現在的內標基本都是穩定同位素標記的,最常見的是D和13C。同位素內標和被檢測物是同一個物質,但是其中的幾個氫原子被氘所取代,或者是12C換成了13C,理化性質基本不變。